分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。由于核酸,蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量樣本量很小,于是超微量分光光度計應運而生。超微量分光光度計近年來(lái)已經(jīng)替換普通的分光光度計成為分子生物學(xué)實(shí)驗室的新寵,廣泛應用于生命科學(xué)實(shí)驗室蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)等領(lǐng)域。
超微量分光光度計的工作原理是利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量。無(wú)論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域,還是在化工、醫藥、環(huán)境檢測、冶金等現代生產(chǎn)與管理部門(mén),紫外可見(jiàn)分光光度計督有廣泛而重要的應用。
超微量分光光度計常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的zui高吸收峰的吸收波長(cháng)260nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類(lèi)型的核酸,事先要選擇對應的系數。如:1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。
超微量分光光度計對工作環(huán)境的要求如下。
?、賰x器應安放在干燥的房間內,使用溫度為5-35℃.相對濕度不超過(guò)85%。
?、趦x器應放置在堅固平穩的工作臺上,且避免強烈的振動(dòng)或持續的振動(dòng)。
?、凼覂日彰鞑灰颂珡?,且應避免直射日光的照射。
?、茈娚炔灰酥苯酉騼x器吹風(fēng),以防止光源燈因發(fā)光不穩定而影響儀器的正常使用。
?、荼M量遠離高強度的磁場(chǎng)、電場(chǎng)及發(fā)生高頻波的電器設備。
?、薰┙o儀器的電源電壓為AC220V±22V,頻率為50Hz±1Hz,并必須裝有良好的接地線(xiàn)。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩壓器或交流恒壓穩壓器,以加強儀器的抗干擾性能。
?、弑苊庠谟辛蚧瘹涞雀g性氣體的場(chǎng)所使用。